引物二聚体（引物二聚体和条带怎么区分）_引物_扩增_退火

本文目录一览：

• 1、如何减少和避免引物二聚体
• 2、有引物二聚体,非特异性扩增带是怎么回事
• 3、在做PCR时,出现引物二聚体
• 4、引物二聚体可以在凝胶成像中检测出来吗
• 5、怎样消除引物二聚体
• 6、什么是引物二聚体,它对PCR反应有什么影响?

如何减少和避免引物二聚体

一般情况下，可以通过提高退火温度来降低引物二聚体。如果二聚体非常严重的话，建议重新设计引物。

引物二聚体如果不影响产物的形成，是可以忽略的，但如果二聚体过多，导致引物与模板结合的特异性过差，可以用调整PCR体系的手段来解决，比如增加酶活性，减少引物使用量，添加enhancer等等。

从PCR反应本身出发，建议适当的减少引物量、提高退火温度；如果是基于PCR产物，最好是挖胶回收，把你的目标片段特异的回收。

不会，引物二聚体的产生原因是引物之间存在大量的碱基互补配对的情况，引物在PCR过程已被消耗，放置中不会新增二聚体。在PCR体系中减少引物用量，或者提高退火温度可减少二聚体的产生。

将引物和探针互相进行配对检测，以避免二聚体和发卡结构的形成。 序列选取应在基因的保守区段 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对，避免引物自身形成环状发卡结构 典型的引物18到24个核苷长。

如果引物确定了是不同认为消除的，但是你可以设定条件来选择，还有就是自己逐个的检验，直到这几个条件都满足为止。。

有引物二聚体,非特异性扩增带是怎么回事

1、物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出 现假阴性；退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影 响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。

2、降低引物和聚合酶的用量，提高退火温度，或者是采用梯度PCR法，测试能够获得最佳结果的温度退火。

3、就是引物并没有与我们设想的片段结合，最后扩增出非目的条带，一般低退火温度会增加非特异性扩增，高退火温度会减少非特异性扩增。

4、DNA长度较小。那很有可能是引物二聚体。出现这个情况，可能的原因有3：1。引物本身不对，不是目的DNA扩增需要的引物。2。DNA回收提纯的问题 3。PCR体系内镁离子浓度问题。。建议排查下各项。

在做PCR时,出现引物二聚体

根本原因应该是RNA纯度不够，导致反转录的cDNA浓度低。

引物设计不合理，两条或一条引物的3`端有互补序列，造成自己配对延伸而扩增。建议重新设计引物，或者降低退火温度、增加模板和引物的量试下，不过能不能扩出来看运气了。

影响不大。探针法没影响，染料掺入法，现在的仪器都自动刷掉那些长度太小的扩增信号。有人说可能对溶解曲线产生影响，不过我做染料掺入法做的少，没试过。

引物二聚体可以在凝胶成像中检测出来吗

1、曝光太强了，你把光圈调小一点，这样曝光会弱一点，就能够去掉背景的白色了。

2、nanodrop可以测引物二聚体 紫外可见分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。

3、引物二聚体的出现是必然的，但这或多或少是个问题。电泳时引物二聚体带的缺失并不意味着没有二聚体，而是其含量低，我们肉眼是看不到的。

怎样消除引物二聚体

1、从PCR反应本身出发，建议适当的减少引物量、提高退火温度；如果是基于PCR产物，最好是挖胶回收，把你的目标片段特异的回收。

2、有时扩增不出来。为了保证实验的重复性和稳定性，需要尽可能减少引物二聚体的发生。一般情况下，可以通过提高退火温度来降低引物二聚体。如果二聚体非常严重的话，建议重新设计引物。

3、pcr产物回收试剂盒能去除引物二聚体，因为有很好的吸附性。引物二聚体在不同领域中有不同意义，但基本涵义都表示相同或同一种类的物质，以成双的型态出现，可能具有单一状态时没有的性质或功能。

4、如果引物确定了是不同认为消除的，但是你可以设定条件来选择，还有就是自己逐个的检验，直到这几个条件都满足为止。。

5、引物二聚体如果不影响产物的形成，是可以忽略的，但如果二聚体过多，导致引物与模板结合的特异性过差，可以用调整PCR体系的手段来解决，比如增加酶活性，减少引物使用量，添加enhancer等等。

什么是引物二聚体,它对PCR反应有什么影响?

1、是在pcr反应中，两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体，这种聚合体出现了，就相当于原本可以扩增的原料链减少了，即会导致扩增的效率降低，所以最好能避免这种物质的出现。

2、引物二聚体是引物的3端间相互错配扩增形成的。引物二聚体的出现是必然的，只是或多或少的问题，电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现，只是含量低我们 的肉眼看不到而已。

3、引物二聚体是引物3端不匹配放大形成的。 引物二聚体的出现是必然的，但这或多或少是个问题。电泳时引物二聚体带的缺失并不意味着没有二聚体，而是其含量低，我们肉眼是看不到的。